气质联用仪
气质联用(GC/MS)被广泛应用于复杂组分的分离与鉴定,其具有GC的高分辨率和质谱的高灵敏度,是生物样品中药物与代谢物定性定量的有效工具。
一、GC-MS的基本构造
二、气相色谱单元
它是化合物分离单元,主要包括气源、流量调节阀、色谱柱、恒温器和进样器。
1. 热进样和冷进样
热进样:分流/无分流进样
直接进样(WBI),宽口毛细柱和填充柱。
冷进样:PTV进样
冷柱头进样
2. 歧视效应和热分解
热进样(SPL,WBI):存在歧视现象和样品热分解
冷进样(OCI,PTV):进样是在较低温度下进行,定量精度高,歧视效应和热解效应的影响小。
减小热进样歧视现象的方法主要有:快速进样法、溶剂冲洗法、热针法。
溶剂冲洗法
3. 冷进样
冷进样是指样品在冷状态,低于样品沸点的温度下进样,气化室快速升温使样品气化。
PTV进样方式:分流进样(高浓度样)
无分流进样(低浓度样)
大体积进样-LVI(痕量分析)
进样口的结构
分流进样口示意图(分流比:SPL.R=F1:F2)
WBI进样口示意图(主要用于宽孔径毛细管柱填充柱)
OCI/PTV进样口示意图
三、质谱单元
质谱仪的基本部件有:离子源、滤质器、检测器三部分组成,它们被安放在真空总管道内。接口:由GC出来的样品通过接口进入到质谱仪,接口是色质联用系统的关键。
真空系统是化合物进入质谱仪后离子化效率的环境保障:质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在高真空状态下工作,以减少本底的干扰,避免发生不必要的分子-离子反应。
1. 离子源
离子源的作用是接受样品产生离子,常用的离子化方式有:
A:电子轰击离子化(electron impact ionization,EI)
EI是最常用的一种离子源,有机分子被一束电子流(能量一般为70eV)轰击,失去一个外层电子,形成带正电荷的分子离子(M+),M+进一步碎裂成各种碎片离子、中性离子或游离基,在电场作用下,正离子被加速、聚焦、进入质量分析器分析。
EI离子源概念图
EI特点:
⑴、电离效率高,能量分散小,结构简单,操作方便。
⑵、图谱具有特征性,化合物分子碎裂大,能提供较多信息,对化合物的鉴别和结构解析十分有利。
⑶、所得分子离子峰不强,有时不能识别。
本法不适合于高分子量和热不稳定的化合物。
B:化学离子化(chemicalionization,CI)
将反应气(甲烷、异丁烷、氨气等)与样品按一定比例混合,然后进行电子轰击,甲烷分子先被电离,形成一次、二次离子,这些离子再与样品分子发生反应,形成比样品分子大一个质量数的(M+1) 离子,或称为准分子离子。准分子离子也可能失去一个H2,形成(M-1)离子。
CI特点:
⑴、不会发生象EI中那么强的能量交换,较少发生化学键断裂,谱形简单。
⑵、分子离子峰弱,但(M+1) 峰强,这提供了分子量信息。
C: 场致离子化(fieldionization,FI)
适用于易变分子的离子化,如碳水化合物、氨基酸、多肽、抗生素、苯丙胺类等。能产生较强的分子离子峰和准分子离子峰。
D: 场解吸离子化( field desorption ionization,FD)
用于极性大、难气化、对热不稳定的化合物。
E: 负离子化学离子化(negative ion chemical ionization,NICI)
是在正离子MS的基础上发展起来的一种离子化方法,其给出特征的负离子峰,具有很高的灵敏度(10-15g)。
1. 质量分析器
其作用是将电离室中生成的离子按质荷比(m/z)大小分开,进行质谱检测。常见质量分析器有:
A:四极质量分析器(quadrupole analyzer)
原理:由四根平行圆柱形电极组成,电极分为两组,分别加上直流电压和一定频率的交流电压。样品离子沿电极间轴向进入电场后,在极性相反的电极间振荡,只有质荷比在某个范围的离子才能通过四极杆,到达检测器,其余离子因振幅过大与电极碰撞,放电中和后被抽走。因此,改变电压或频率,可使不同质荷比的离子依次到达检测器,被分离检测。
B:扇形质量分析器
磁式扇形质量分析器(magnetic-sector massanalyzer)被电场加速的离子进入磁场后,运动轨道弯曲了,离子轨道偏转可用公式表示:当H,V一定时,只有某一质荷比的离子能通过狭缝到达检测器。
特点:分辨率低,对质量同、能量不同的离子分辨较困难。
C:双聚焦质量分析器(double-focusing massassay)
由一个静电分析器和一个磁分析器组成,静电分析器允许有某个能量的离子通过,并按不同能量聚焦,先后进入磁分析器,经过两次聚焦,大大提高了分辨率。
D:离子阱检测器(ion trap detector)
原理类似于四极分析器,但让离子贮存于井中,改变电极电压,使离子向上、下两端运动,通过底端小孔进入检测器。
3. 检测器
检测器的作用是将离子束转变成电信号,并将信号放大,常用检测器是电子倍增器。当离子撞击到检测器时引起倍增器电极表面喷射出一些电子,被喷射出的电子由于电位差被加速射向第二个倍增器电极,喷射出更多的电子,由此连续作用,每个电子碰撞下一个电极时能喷射出2~3个电子,通常电子倍增器有14级倍增器电极,可大大提高检测灵敏度。
四、GC-MS的常用术语